血清脂蛋白的快速離心分離法
利用不同容量的角式轉頭及很容易配制的梯度液,在各種型號的超速離心機上都能得到滿意的分離結果。下面舉了幾個分離實例,實際上還可以應用于各種型號各種容量的固定角式轉頭。
(一)梯度液
A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1
ml 1N NaOH,混勻至全部溶解。加重蒸水至1000ml最后再加3ml重蒸水(Nacl:0.195mol)。終密度1.006g/cm
3,PH10.37。
B液:加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm
3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH9.72。
C液:加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm
3。(Nacl:0.195mol, NaBr:7.65mol),PH8.86。
(二)離心機及轉頭
• 離心機:Hitachi CP-MX系列超速離心機或其他類似機組。
Hitachi CS-150GXL微量超速離心機。
• 轉頭,離心管;S 140 AT:140,000rpm,1,050,000×g,10×2ml,K=5,1PC厚壁管。
S 80 AT3:80,000rpm,415,000×g,8×8ml,K=23,6PC厚壁管。
S 70 AT:70,000rpm,505,000×g,8×40ml,K=44,40PA管。
(三)血漿-血球分離:
全血,角轉頭或甩平轉頭3000rpm×20min,沉淀為血細胞,上清血漿待用。
(四)乳糜粒分離
離心參數:各種轉頭均可用,4×10
6(g×min),10℃
梯度液:離心管下部3/4容積為血漿,上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。
離心結果:乳糜粒上浮,離心管傾斜,吸管貼管壁慢吸出(約占血漿容積的2~6%。禁令12小時以上供血者血漿中乳糜含量很低,食后供血者含量較高。
(五)血清脂蛋白分離
VLDL分離(ρ<1.006g/cm
3)
轉頭 |
離心管內液體分布 |
離心參數 |
結果
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